2021年，單抗藥物市場表現(xiàn)良好，抗體偶聯(lián)藥物、雙特異性抗體研發(fā)受到更多藥企關注。

 

　　雙特異性抗體通常是人工合成的，為同時具有兩種特異性抗原結合位點的抗體，與傳統(tǒng)單克隆抗體相比，靶向性更強、毒性更低但研發(fā)生產(chǎn)技術壁壘更高。根據(jù)有無Fc片段，雙特異性抗體可分為IgG類雙抗（含F(xiàn)c片段）和非IgG類雙抗（無Fc片段）。IgG類雙抗又可進一步分為對稱性IgG類雙抗和不對稱性IgG類雙抗。

 

　　IgG類雙抗在結構上與天然抗體接近，抗原性較低。Fc片段能與循環(huán)血液中FcRn受體結合避免被溶體酶水解而具有較長半衰期。同時，IgG類雙抗具有Fc介導的效應功能，如抗體依賴性細胞介導的細胞毒性作用（ADCC）、補體依賴性細胞毒性作用（CDC）和抗體依賴細胞介導的細胞吞噬作用（ADCP）。此外，F(xiàn)c段含有A/G蛋白，可利用親和層析方式進行抗體純化。但I gG類雙抗也有如腫瘤的滲透率較低、輕重鏈錯配率較高等缺點。非IgG類雙抗結構簡單，制備工藝簡單，分子量小且具有較高的腫瘤滲透率，但其具有半衰期短及無Fc片段介導效應的缺點。

 

 

　　雙抗是由兩個不同的輕鏈和重鏈通過組合的方式形成。兩個不同的輕鏈和重鏈具有16種組合方式，而這種隨機組合形成的抗體中，只有12.5%的抗體能滿足結合雙特異性抗原位點的需求。輕重鏈錯配會導致蛋白雜質(zhì)多、雙抗產(chǎn)量低。針對輕重鏈錯配問題，雙特異性抗體研發(fā)企業(yè)紛紛針對IgG類雙抗和非IgG類雙抗開發(fā)了不同的技術平臺。

 

 

　　IgG類雙抗較非IgG類雙抗更易出現(xiàn)輕重鏈錯配問題，相關技術平臺主要致力于解決此類問題。

 

 

　　KIH技術最早提出解決重鏈錯配問題的方法，通過分別改變兩個重鏈結構上的氨基酸，使其中一條鏈上的大氨基酸突變成小氨基酸，相對應的另一條鏈上的小氨基酸突變成大氨基酸，突變后的位點分別形成凸、凹結構，從而通過靜電導向配對形成異源二聚體。此方法可防止90%以上的重鏈錯配問題，但不能防止輕鏈錯配。之后，羅氏在該平臺基礎上改進形成Cross Mab技術，即將兩個抗體的Fc部分通過KIH技術形成異源二聚體，同時將其中一個抗體的Fab段輕重鏈進行交換，形成正確的輕鏈結合。

 

 

　　該技術通過兩個靶向不同表位的單抗Fab臂互換反應得到雙特異性抗體。Fab臂互換反應是二硫鍵異構化反應和CH3域解離-締合的結果，其中在親代抗體鉸鏈區(qū)的重鏈二硫鍵被還原，所得游離的半胱氨酸與另一個親代抗體分子的半胱氨酸殘基形成重鏈間二硫鍵，同時親代抗體的CH3域通過解離-締合釋放和再形成。西安楊森研發(fā)的Amivantamab即利用了此平臺技術，同時靶向C-MET和EGFR受體。

 

 

　　非IgG類雙抗由于缺乏Fc片段，無法與FcRn結合，因而普遍半衰期較短，各技術平臺主要通過延長半衰期來促進非IgG類雙抗的臨床應用。

 

 

　　該平臺是安進公司用linker將兩個ScFV片段串聯(lián)起來，一個ScFV片段靶向T細胞CD3靶點，另一個ScFV片段靶向腫瘤細胞，串聯(lián)后的雙抗片段可同時結合腫瘤細胞和T細胞，并誘導T細胞殺滅腫瘤細胞。由于分子量較小，雙抗片段對腫瘤細胞的滲透率大大提高。目前已上市的雙抗片段藥物博納吐單抗采用的就是該技術，但其半衰期只有2小時。針對此缺點，安進公司在此技術基礎上改良形成HLE-BITE技術——通過連接Fc片段，可使半衰期顯著延長到44小時以上。

 

 

　　該技術由Affimed公司研發(fā)，合成的抗體分子量在100kd左右，相對于普通非IgG類雙抗，可顯著延長半衰期。

 

 

　　目前全球已有4個雙抗產(chǎn)品上市，首款上市藥品為凌騰醫(yī)藥研發(fā)的卡妥索單抗，該產(chǎn)品為T細胞重定向抗體，獲批適應癥為癌性腹水。該藥于2009年獲得歐洲藥品管理局（EMA）批準上市，后由于市場表現(xiàn)不佳已于2017年退市。近期，凌騰醫(yī)藥已在全球范圍內(nèi)重啟該藥物的上市流程，截至目前，已在我國啟動了針對膀胱癌患者的Ⅰ期/Ⅱ期臨床試驗，同時在韓國等地針對胃癌的Ⅲ期臨床試驗也已獲批。第二款上市雙抗藥品為安進公司研發(fā)的非I gG類藥物博納吐單抗，獲批適應癥是B細胞性白血病，百濟神州已獲得該藥引進授權。第三款上市雙特異性抗體藥物為羅氏研發(fā)的艾美賽珠單抗，該藥物能夠?qū)⒓せ钐烊荒壜?lián)所需的因子IXa和因子X聚集在一起，幫助A型血友病患者恢復凝血功能。2018年11月，艾美賽珠單抗通過優(yōu)先審評程序在我國上市，用于存在凝血因子Ⅷ抑制物的A型血友病患者（先天性凝血因子Ⅷ缺乏）的常規(guī)預防性治療，以防止出血或降低出血發(fā)生的頻率。第四款藥物為強生的Amivantamab，該藥物批準用于治療EGFR外顯子20插入突變陽性的非小細胞肺癌患者。

 

　　國內(nèi)藥企對雙特異性抗體的研究進展迅速。據(jù)不完全統(tǒng)計，目前進入臨床試驗階段的雙特異性抗體藥物有60余種，其中三分之二藥物的適應癥為腫瘤治療。除此之外，在免疫、血液、眼科等領域也有雙抗產(chǎn)品布局。雙特異性抗體靶點主要以下面幾種組合方式為主：同時靶向兩個腫瘤細胞信號通路蛋白發(fā)揮協(xié)同治療作用；橋連免疫細胞和腫瘤細胞信號通路蛋白（又稱T細胞重定向）；雙重免疫調(diào)節(jié)作用；免疫檢查點靶點和腫瘤信號靶點互相配合。

 

　　目前，我國雙抗藥物的產(chǎn)業(yè)鏈集中在中上游環(huán)節(jié)。眾多企業(yè)通過研發(fā)外包服務降低研發(fā)成本，影響上游產(chǎn)業(yè)的主要因素為生物反應器的類型以及培養(yǎng)條件（雙特異性抗體的細胞生長過程中代謝水平可能發(fā)生改變，需要評估出有利于細胞新陳代謝的條件）。同時，由于雙特異性抗體易形成聚合體，故對抗體的純化提出更高要求，產(chǎn)量會相應降低。此外，重鏈和輕鏈情況眾多，簡單的凝膠分析已不滿足需求，需開發(fā)出更靈敏的分析方法。

 

　　當前，我國雙抗藥物研發(fā)靶點布局同質(zhì)化程度低，抗體研發(fā)著力優(yōu)化生產(chǎn)工藝以及解決引起的細胞因子風暴等不良反應。國內(nèi)擁有知識產(chǎn)權且技術成熟的技術平臺較少，整體市場呈現(xiàn)良好的競爭格局。隨著雙特異性抗體藥物臨床試驗的不斷推進，國內(nèi)臨床研究階段雙抗近期有望迎來上市突破。（火石創(chuàng)造供稿）