藥品生產(chǎn)后必須對(duì)其生產(chǎn)設(shè)備采取一定的程序進(jìn)行清洗，防止藥物成分殘留到下一批產(chǎn)品中，形成交叉污染，從而影響下一批產(chǎn)品的質(zhì)量及安全性。清潔驗(yàn)證是證實(shí)清洗程序合理性的必要技術(shù)手段。

 

WHO、EU、ICH、FDA及我國(guó)藥品GMP均對(duì)藥品生產(chǎn)清潔驗(yàn)證提出了相關(guān)要求:
1）使用同一生產(chǎn)設(shè)備生產(chǎn)不同的產(chǎn)品，必須進(jìn)行清潔驗(yàn)證，確定可接受藥物殘留水平。
2）當(dāng)同一設(shè)備僅生產(chǎn)一種產(chǎn)品時(shí)，不涉及交叉污染，無需開展系統(tǒng)的殘留物限度清潔驗(yàn)證，通常通過目視法檢查設(shè)備表面無可見殘留物并保障微生物水平即可。

 

清潔驗(yàn)證的取樣方法主要有擦拭取樣法（直接取樣）和淋洗取樣法（間接取樣），為達(dá)到清潔目的，兩種方法可結(jié)合使用。通常根據(jù)待清潔品種各組成成分的清潔難易程度、溶解度和允許最大殘留量（MACO值）來確定需要清潔的組分。 

 

本文參照歐洲原料藥委員會(huì)（APIC）在原料藥工廠清潔驗(yàn)證指南（2016.09）中給出的藥物活性成分殘留限度的確定方法，結(jié)合國(guó)內(nèi)清潔驗(yàn)證限度確定相關(guān)文獻(xiàn)，對(duì)藥品生產(chǎn)設(shè)備清潔中活性成分殘留限度確認(rèn)方法進(jìn)行簡(jiǎn)要?dú)w納，并初步擬定待清潔活性成分的分析檢測(cè)方法驗(yàn)證方案。


 

在可以獲得可接受日暴露水平（ADE） 或允許日暴露量（PDE） 值時(shí) ,可采用ADE或PDE值計(jì)算最大允許殘留量（MACO）。 

首先，計(jì)算ADE值或PDE值，計(jì)算公式如下：

其次，根據(jù)ADE值或PDE值計(jì)算MACO值，計(jì)算公式如下：

 

當(dāng)多品種共線生產(chǎn)時(shí)，可以選擇ADE或PDE值較小的品種作為上一產(chǎn)品，選擇MBS/TDD比值最小的品種作為生產(chǎn)的下一產(chǎn)品。


 

如果可以獲得有限毒性數(shù)據(jù)和日治療劑量（TDD）值，可以采用本計(jì)算方式，就原料藥而言，該公式適用于原料藥生產(chǎn)工藝A更換到原料藥生產(chǎn)工藝B的情況。計(jì)算公式如下：

如果無法獲得其它數(shù)據(jù)（例如， ADE、 OEL、 TDD等值），僅能獲得半數(shù)致死量數(shù)據(jù)（例如化學(xué)物質(zhì)、中間體、清潔劑等）， MACO可以基于半數(shù)致死量數(shù)據(jù)來計(jì)算 。 

 

首先，計(jì)算NOEL值（無可見影響水平）：

其次，根據(jù)NOEL值計(jì)算MACO值：

 

可利用以下公式，基于一個(gè)通用限度確定MACO限度，單位為ppm。

 

例如，就原料藥而言，通用限度為100ppm時(shí)，MACO為最小批量（MBS）的0.01%；通用限度為10ppm時(shí)，MACO為最小批量（MBS）的0.001%。

通過上述公式，確定MACO值后，即可通過如下公式，計(jì)算擦拭法及淋洗法的殘留可接受標(biāo)準(zhǔn)。

注意，上述公式中擦拭限度計(jì)算的“總表面積”可為共線產(chǎn)品共用設(shè)備的累積面積。 

 

另外，關(guān)于一般限度10ppm，即10μg/ml或10mg/kg，對(duì)于液體制劑設(shè)備的清潔驗(yàn)證標(biāo)準(zhǔn)確定，淋洗法限度即為10μg/ml。設(shè)下一批產(chǎn)品的生產(chǎn)批量為B（ml或kg），上批產(chǎn)品與下批產(chǎn)品的設(shè)備共用累積接觸面積為D（cm²），為確保安全，應(yīng)除以安全因子F（可依據(jù)藥物生理活性水平確定，通常分為1000、100、10三個(gè)級(jí)別），可按照如下過程計(jì)算擦拭法殘留限度Ld。

 

根據(jù)各公司所生產(chǎn)產(chǎn)品的屬性不同（例如，毒性、藥物活性等），從上一產(chǎn)品帶入下一產(chǎn)品中的污染物質(zhì)最大濃度通用上限通常設(shè)定為5~500ppm（原料藥設(shè)定為100ppm較為常見，注射劑可設(shè)定為10ppm）。

 

以上主要給出了4種藥物殘留限度的計(jì)算標(biāo)準(zhǔn)，其中第一種（基于健康數(shù)據(jù)）及第三種（基于半數(shù)致死量）方法更為科學(xué)，但因ADE、PDE值或LD50值難以明確，故用之較少，而第二種（基于日治療劑量）及第四種（基于一般限度）方法更為常用。因此，在確定殘留限度時(shí)，應(yīng)綜合評(píng)比上述幾種方法，基于最大程度上降低交叉污染的原則，選擇最為合適的結(jié)果作為清潔驗(yàn)證的最終可接受標(biāo)準(zhǔn)。

 

在正式開展清潔驗(yàn)證之前，需進(jìn)行針對(duì)性分析方法的開發(fā)與驗(yàn)證。通常選擇靈敏度較高的方法，如高效液相色譜法、氣相色譜法、紫外分光光度法等。首選可定量的檢測(cè)方法，也可選擇限度檢測(cè)方法。一般情況下，可以直接選擇待清潔品種質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中規(guī)定的含量測(cè)定方法。所選用的分析方法均需按照《中國(guó)藥典》（2020年版）四部通則9101 分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則進(jìn)行驗(yàn)證。

制劑清潔驗(yàn)證分析方法主要驗(yàn)證項(xiàng)目及可接受標(biāo)準(zhǔn)如下：

 

擦拭法清潔驗(yàn)證分析方法驗(yàn)證



 

備注：

 

• 擦拭法準(zhǔn)確度試驗(yàn)樣品回收過程：將配制好的回收率考察溶液，定量添加至取樣板表面（根據(jù)設(shè)備情況確定取樣板材質(zhì)，規(guī)格通常為5cm×5cm），使取樣板風(fēng)干，按照擬定方法用棉簽擦拭取樣板表面，照供試品溶液制備方法制備樣品溶液。

• 擦拭取樣操作方法：用溶劑潤(rùn)濕藥簽，并將其靠在溶劑瓶邊擠壓，以去除多余的溶劑。將藥簽頭按在取樣表面上，用力使其稍彎曲，平穩(wěn)而緩慢地擦拭取樣表面，在向前移動(dòng)的同時(shí)，將其從一邊移動(dòng)到另一邊。擦拭的過程應(yīng)覆蓋整個(gè)取樣表面，然后翻轉(zhuǎn)藥簽，讓其另一側(cè)也進(jìn)行擦拭，但其方向應(yīng)與前次垂直。
  
   

擦拭法取樣藥簽擦拭方法示例如下圖所示：

 

藥簽擦拭取樣示意圖

表  淋洗法清潔驗(yàn)證分析方法驗(yàn)證

注：該表中淋洗法準(zhǔn)確度試驗(yàn)考察的是檢測(cè)方法的準(zhǔn)確度，并非淋洗回收率，接受標(biāo)準(zhǔn)可依據(jù)限度酌情調(diào)整。

 

A注射液清潔驗(yàn)證殘留限度確認(rèn)過程如下： 

無法獲得該注射液有效成分的ADE值或PDE值。 

全部共線產(chǎn)品中，B注射液的日用劑量最大，折算成體積為24ml，其最小生產(chǎn)批量為200L；共用設(shè)備累積接觸面積為367380cm²。

? 計(jì)算方法一：基于日治療劑量的可接受標(biāo)準(zhǔn)（先生產(chǎn)A產(chǎn)品，再生產(chǎn)B產(chǎn)品）

其中：

• MACO代表產(chǎn)品A能進(jìn)入到產(chǎn)品B中的最大可接受量（mg）；

• MBS代表B產(chǎn)品的最小批量（ml或g）；

• TDDprevious代表A產(chǎn)品的日最小治療劑量（mg）；

• TDDnext代表在設(shè)備中生產(chǎn)B產(chǎn)品的最大日劑量（ml或g）；

• SF代表安全系數(shù)，可取1000。

注：MBS與TDDnext單位應(yīng)統(tǒng)一。

對(duì)于本產(chǎn)品而言，產(chǎn)品A最小治療劑量按50mg計(jì)，產(chǎn)品B最小批量200000ml，最大日劑量為24ml。因此A注射液的有效成分能進(jìn)入到B注射液中而不致引起風(fēng)險(xiǎn)的最大量為：

 

淋洗水按200L計(jì)，則淋洗水殘留限度416.67mg÷200L=2.083μg/ml 

共用設(shè)備累積接觸面積為367380cm²，

則擦拭殘留限度為416.67mg÷367380cm²=1.134μg/ cm²

 

? 計(jì)算方法二：基于半數(shù)致死量的可接受標(biāo)準(zhǔn)（先生產(chǎn)A產(chǎn)品，再生產(chǎn)B產(chǎn)品）

 

其中：

• MACO代表產(chǎn)品A能進(jìn)入到產(chǎn)品B中的最大可接受量（mg）；

• MBS表產(chǎn)品B的最小批量（ml或g）；

• TDDnext代表產(chǎn)品B的最大日劑量（ml或g）；

• SF代表安全系數(shù)，一般取1000；

• LD50代表動(dòng)物的半數(shù)致死量，證明動(dòng)物（如小鼠）和給藥途徑（如靜注\口服）很重要（mg/kg）；

• BW代表一個(gè)成年人的平均體重，按70kg計(jì)算；2000代表一個(gè)經(jīng)驗(yàn)常數(shù)。

注：MBSnext與TDDnext單位應(yīng)統(tǒng)一。

對(duì)于本產(chǎn)品而言，產(chǎn)品A的小鼠半數(shù)致死量按照156mg/kg（靜脈注射）計(jì)，產(chǎn)品B的最小批量為200000ml，最大日劑量為24ml。因此A注射液的有效成分能進(jìn)入到B注射液中而不致引起風(fēng)險(xiǎn)的最大量為：

淋洗水按200L計(jì)，則淋洗水殘留限度

45.500mg÷200L =0.228μg/ml 

共用設(shè)備累積接觸面積為367380cm²，

則擦拭殘留限度為45.500mg÷367380cm²=0.124μg/ cm²

 

? 計(jì)算方法三：一般限度，采用上批產(chǎn)品對(duì)下批產(chǎn)品的污染不得超過10ppm（10mg/kg）作為限定指標(biāo)

最小批量200L，共用設(shè)備累積面積為367380cm² 

淋洗法限度：10ppm=0.001%=0.001g/100ml=10μg/ ml

擦拭法限度：

其中：

• B代表B產(chǎn)品的最小批量（ml）；

• D代表共用設(shè)備累積面積（cm2）； 

• F代表安全因子，一般取10。
  
   

采用上述3種計(jì)算方法中結(jié)果最小的限度值，即擦拭法殘留限度不得過0.124μg/ cm²，淋洗法殘留限度不得過0.228μg/ml。

清潔驗(yàn)證是防止藥品生產(chǎn)過程中發(fā)生污染與交叉污染的重要措施之一，企業(yè)應(yīng)針對(duì)藥品特性、生產(chǎn)設(shè)備特點(diǎn)等因素建立明確可控的清洗程序，并依據(jù)科學(xué)分析制定合理的殘留限度標(biāo)準(zhǔn)，建立并驗(yàn)證科學(xué)的取樣及分析方法，以確保驗(yàn)證結(jié)果準(zhǔn)確，藥品生產(chǎn)穩(wěn)定可控，藥品質(zhì)量安全可靠。

 

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