1.綜述
鹽酸莫西沙星是拜耳公司開發(fā)的第四代新型8-甲氧基氟喹諾酮類抗菌藥物，具有抗菌譜廣、抗菌力強、交叉耐藥少、光毒性低、藥物相互作用少、生物利用度高、組織穿透力好等特點。最早于1999年6月在德國獲批上市，并于2002年8月獲批進口中國。截至2011年5月，鹽酸莫西沙星片已在包括上述國家在內的127個國家和地區(qū)獲得批準。
鹽酸莫西沙星結構如下：
鹽酸莫西沙星合成工藝路線如下：
從結構來看主要由兩個片段組成，片段一為(S,S)-2,8-二氮雜二環(huán)[4,3,0]壬烷（CAS：151213-40-0），作為本品合成的起始原料之一；合成路線如下：
片段二為8-甲氧基氟喹諾酮類結構，以1-環(huán)丙基-6,7-二氟-1,4-二氫-8甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯（CAS：112811-71-9）起始原料反應制得，其合成路線如下：
2.起始原料選擇依據(jù)
在原料藥研究DMF備案中，起始原料選擇依據(jù)尤為重要，會影響到API注冊的風險，依據(jù)ICHQ11原則，確定起始原料，如下：
1）起始原料A和B為原料藥API關鍵結構片段，可以通過有效手段進行鑒別。
2）兩個起始原料A和B質量標準合理建立，相關雜質的控制及限度制定依據(jù)合理，滿足可持續(xù)生產(chǎn)出合格原料藥。
3）原料藥有手性中心引入是來源于起始原料A和B，其中異構體雜質的控制可優(yōu)先采取源頭控制策略。
4）對原料藥藥典規(guī)定的雜質，需確定其產(chǎn)生機理，并對產(chǎn)生該雜質的源頭進行合理控制，加標確定合適的質控限度，確保生產(chǎn)的原料藥符合要求。
5）工藝路線一般要求工藝路線要求至少3步化學鍵合反應，在滿足注冊要求的前提下，確保起始原料選擇的合理性。
6）對于外購原料A和B，嚴格按供應商確認程序進行審計和資質確認，要求供應商對起始原料質量可能產(chǎn)生影響的任何工藝變更及時通知申報方，降低未來工藝變更可能對原料藥質量造成影響的風險，并定期對供應商進行全面的質量審計，保證其生產(chǎn)的原料持續(xù)符合質量要求。
選擇起始原料應考慮上述全部原則，而不是孤立的嚴格遵循單個原則。
3.起始原料分析方法建立關鍵點
3.1起始原料：(S,S)-2,8-二氮雜二環(huán)[4,3,0]壬烷
3.1.1雜質分析
3.1.2研究思路
1）有關物質方法：主要檢測雜質-0B、雜質-0C、雜質-0D與未知雜質，采用HPLC法。
2）有關物質方法Ⅱ：主要檢測雜質-0F與雜質-0H，此兩雜質在有關物質條件下出峰較早，干擾測定，單建方法進行檢測。其中雜質-0F與雜質-0H極性極大，采用常規(guī)C18色譜柱基本沒有保留；雜質-0F與雜質-0H結構中均含有N原子，在酸性的流動相條件下，這兩個化合物帶正電荷，此時采用含有庚烷磺酸鈉的流動相時，帶正電的兩個化合物會和帶負電的庚烷磺酸鈉基團形成靜電作用，從而保留增強。
3）異構體：雜質-0A為對映異構體，采用柱前手性衍生試劑GITC進行衍生方法檢測。
4）雜質-0G：采用陽離子交換色譜柱進行檢測；
5）雜質-0E：為酒石酸，采用HPLC法進行檢測。
3.1.3 檢測方法優(yōu)化思路
流動相加入離子對試劑庚烷磺酸鈉時，離子對試劑極易吸附在普通色譜柱填料的活性位點上，難以洗脫下來，導致色譜柱死體積增加，保留時間提前，理論塔板數(shù)降低，分離度變差的情況，這個吸附過程是不可逆的，因此在選擇色譜柱的時候需要格外注意。選擇島津Shim-packScepterC18色譜柱，此款色譜柱采用新開發(fā)的有機硅烷層與無機硅烷層多層結構的混合型顆粒，既保持了無機硅烷的高機械強度，也極大的提高了強酸堿的耐受性（pH1.0~12.0）。同時運用微反應器造粒技術和多級端基封尾技術，保證了可以長期耐受離子對試劑流動相。
分析方法：
色譜柱:Shim-packScepterC18-120（5μm，4.6×250mm）PN：227-31020-06；SN：106YA80292
柱溫30℃；檢測波長210nm；流速1ml/min；進樣量20μl；供試品濃度：1mg/min；
流動相A：0.02mol庚烷磺酸鈉溶液（磷酸調pH至2.9）
流動相B：乙腈
稀釋劑：流動相A
梯度洗脫程序：
說明：色譜圖從上到下依次為雜質E和雜質F混合溶液、空白、其他雜質混合溶液、供試品溶液。
結果：空白、其他雜質均不干擾檢測；供試品中未檢出雜質E和F。
3.2起始原料：1-環(huán)丙基-6,7-二氟-1,4-二氫-8甲氧基-4-氧代-3-喹啉羧酸乙酯
3.2.1雜質分析
3.2.2研究思路
1）有關物質方法：主要檢測雜質-1A、雜質-1B、雜質-1C、雜質-1D、雜質-1F、雜質-1H、雜質-1L與未知雜質。
2）有關物質方法Ⅱ：主要檢測雜質-1M與雜質-1I；雜質MXC-1M在原有關物質條件下靈敏度不符合要求，雜質MXC-1I與主峰重合，另新建方法進行研究。
3）有關物質方法Ⅲ：主要檢測雜質-1K，該雜質紫外吸收較弱，采用GC-MS進行研究，在后續(xù)步驟中控制。
4）有關物質方法Ⅳ：主要檢測雜質-1J，為致突變雜質，紫外吸收較弱，結構中有醛基，采用2,4-二硝基苯肼衍生進行研究。
5）有關物質方法Ⅴ：主要檢測雜質-1G和雜質-1O，均為致突變雜質，靈敏度較低，單獨進行研究。
6）有關物質方法Ⅵ：主要檢測雜質-1E，為致突變雜質，采用GC方法單獨進行研究。
3.2.3 檢測方法優(yōu)化思路
由于目標物結構類似，極性差異小，需要選擇島津Shim-packScepterHD-C18色譜柱進行分離，Shim-packScepterHD-C18填料為為聚合型鍵合，立體選擇性較強，適合分離結構類似的化合物。
分析條件：
色譜柱：Shim-packScepterHD-C18-80（5μm,4.6×250mm）PN：227-31024-06；SN：127YA90057
柱溫40℃；檢測波長220nm；流速1ml/min；進樣量20μl；供試品濃度：1mg/min
流動相A：0.02mol磷酸二氫鉀溶液
流動相B：甲醇-乙腈（70:30）
稀釋劑：0.2%磷酸-甲醇（45：55）溶液（用三乙胺調節(jié)pH至6.3）
梯度洗脫程序：
系統(tǒng)適用性溶液
出峰順序：雜質A、雜質L、雜質B、雜質D、雜質C、雜質F（雜質I）、主峰、雜質G（雜質N）、雜質H、雜質M。
說明：峰8和峰7（主峰）的分離度大于1.5，其他雜質不干擾主峰且和主峰的分離度大于1.5。
4.寄語
在仿制藥研發(fā)領域，起始原料選擇尤為重要，需參考ICHQ11制定合理的起始原料選擇依據(jù)，有助于減少返補風險；對于雜質研究，選擇合理的控制策略，有助于注冊風險的降低；對于分析方法的建立，從各雜質結構分析，分批合理制定雜質研究思路；對于特殊的雜質研究，選擇合理的色譜條件及色譜柱，能有助于快速開發(fā)出合理的檢測方法。
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