產品概述
Cell Counting Kit-8，簡稱 CCK-8 試劑盒，是一種基于 WST-8 而廣泛應用于
細胞增殖和細胞毒性的快速、高靈敏度、無放射性的比色檢測試劑盒。
CCK-8 溶液可以直接加入到細胞樣品中，不需要預配各種成分。WST-8 在
電子耦合試劑存在的情況下，可以被線粒體內的一些脫氫酶還原生成橙黃色
的formazan  。細胞增殖越多越快，則顏色越深；細胞毒性越大，
則顏色越淺。對于同樣的細胞，顏色的深淺 (生成的 formazan 量) 和細胞數(shù)
目呈線性關系

計算公式
細胞存活率=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%
抑制率=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100%
As: 實驗孔吸光度 (含細胞、培養(yǎng)基、CCK-8 溶液和藥物溶液) ；
Ac: 對照孔吸光度 (含細胞、培養(yǎng)基、CCK-8 溶液，不含藥物) ；
Ab: 空白孔吸光度 (含培養(yǎng)基、CCK-8 溶液，不含細胞、藥物) 。

Cell line : HEK293
Medium : DMEM, 10% FBS
Incubation : 37°C, 5% CO2, 2 hours

Cell line : U87, SK-HEP1
Medium : DMEM, 10% FBS
Chemicals : 200 μM Cisplatin (DDP)
Incubation : 37°C, 5% CO2, 2 hours

注：如果待測藥物有氧化性或還原性，可在加入 CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)
基，去掉待測藥物的影響。當待測藥物影響比較小的情況下可以不更換培
養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入待測藥物后的空白吸收即可。
WST-8 是 MTT 的一種升級替代產品，和 MTT 或其它 MTT 類似產品，如
XTT、MTS 等相比有明顯的優(yōu)點。
第一，MTT被線粒體內的一些脫氫酶還原
生成的 formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶劑來溶解；而 WST-8 和
XTT 、MTS 產生的 formazan 都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。
第二，WST-8 產生的 formazan 比 XTT 和 MTS 產生的 formazan 更易溶解。
第三，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加穩(wěn)定，使實驗結果更可靠。
第四，WST-8和 MTT、XTT 等相比線性范圍更寬，靈敏度更高，并且更加穩(wěn)定。
WST-8 對細胞無明顯毒性。加入 CCK-8 溶液顯色后，可以在不同時間反復
用酶標儀讀板，檢測時間更加靈活，便于確定最佳測定時間。

注意事項
1. CCK-8 的培養(yǎng)時間一般為 1-4 小時，但在培養(yǎng) 30 分鐘左右即可取出肉眼
觀察顯色程度，根據(jù)細胞種類而定，需要摸索條件，CCK-8 的最佳反應時
間以具體顯色的最佳時間為準。
2. 使用 96 孔板進行檢測時，如果細胞培養(yǎng)時間較長，一定要注意蒸發(fā)問
題。一方面，由于 96 孔板周圍一圈最容易蒸發(fā)，可以采取棄用周圍一圈
的辦法，改加相同量的 PBS 、水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把 96 孔板置
于靠近培養(yǎng)箱內水源的地方，以緩解蒸發(fā)。
3. 本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應，所以還原劑 (例如一些抗氧
化劑) 會干擾檢測，如果待檢測體系中存在較多的還原劑，需設法去除。
用酶標儀檢測前需確保每個孔內沒有氣泡，否則會干擾測定。
4. 加入藥物中如含有金屬，對 CCK-8 顯色有影響。終濃度為 1 mM 的氯化
亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會抑制 5% 、15% 、90% 的顯色反應，使靈敏度降
低。如果終濃度是 10 mM 的話，將會 100% 抑制。
5. 培養(yǎng)基中的酚紅不會影響實驗結果，酚紅的吸光度可以在計算時，通過
扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會對檢測造成影響。
6. 本產品可以檢測 ，但不能檢測酵母細胞。向 100 μL 培養(yǎng)液
中加入 10 μL CCK-8 溶液，并培養(yǎng) 1-4 小時或過夜。
7. CCK-8 試劑對細胞的毒性非常低。它和活細胞內的脫氫酶持續(xù)反應使溶
液顏色不斷加深，OD 值不斷增加 (注: 活細胞內的脫氫酶是持續(xù)產生的) 。
8. 要測定細胞的具體數(shù)量，建議同時做標準曲線。
9. 建議采用多通道移液器，以減小平行孔間的差異。
10. 以下方法可以終止 CCK-8 反應 (96 孔板) ：
(a). 在顯色反應后，將培養(yǎng)板放置 4°C 冰箱內。(b). 每孔加 10 μL 0.1 M HCl
溶液。(c). 每孔加 10 μL 1% (w/v) 的 SDS (十二烷基硫酸鈉) 溶液。
注意：反應停止后，應在 24 小時內測定。
11. 本產品僅限于專業(yè)人員的科學研究用，不得用于臨床診斷或治療，不
得用于食品或藥品。
12. 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。