產(chǎn)品概述
Cell Counting Kit-8，簡(jiǎn)稱(chēng) CCK-8 試劑盒，是一種基于 WST-8 而廣泛應(yīng)用于
細(xì)胞增殖和細(xì)胞毒性的快速、高靈敏度、無(wú)放射性的比色檢測(cè)試劑盒。
CCK-8 溶液可以直接加入到細(xì)胞樣品中，不需要預(yù)配各種成分。WST-8 在
電子耦合試劑存在的情況下，可以被線(xiàn)粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原生成橙黃色
的formazan  。細(xì)胞增殖越多越快，則顏色越深；細(xì)胞毒性越大，
則顏色越淺。對(duì)于同樣的細(xì)胞，顏色的深淺 (生成的 formazan 量) 和細(xì)胞數(shù)
目呈線(xiàn)性關(guān)系

計(jì)算公式
細(xì)胞存活率=[(As-Ab) / (Ac-Ab)] × 100%
抑制率=[(Ac-As) / (Ac-Ab)] × 100%
As: 實(shí)驗(yàn)孔吸光度 (含細(xì)胞、培養(yǎng)基、CCK-8 溶液和藥物溶液) ；
Ac: 對(duì)照孔吸光度 (含細(xì)胞、培養(yǎng)基、CCK-8 溶液，不含藥物) ；
Ab: 空白孔吸光度 (含培養(yǎng)基、CCK-8 溶液，不含細(xì)胞、藥物) 。

Cell line : HEK293
Medium : DMEM, 10% FBS
Incubation : 37°C, 5% CO2, 2 hours

Cell line : U87, SK-HEP1
Medium : DMEM, 10% FBS
Chemicals : 200 μM Cisplatin (DDP)
Incubation : 37°C, 5% CO2, 2 hours

注：如果待測(cè)藥物有氧化性或還原性，可在加入 CCK-8 之前更換新鮮培養(yǎng)
基，去掉待測(cè)藥物的影響。當(dāng)待測(cè)藥物影響比較小的情況下可以不更換培
養(yǎng)基，直接扣除培養(yǎng)基中加入待測(cè)藥物后的空白吸收即可。
WST-8 是 MTT 的一種升級(jí)替代產(chǎn)品，和 MTT 或其它 MTT 類(lèi)似產(chǎn)品，如
XTT、MTS 等相比有明顯的優(yōu)點(diǎn)。
第一，MTT被線(xiàn)粒體內(nèi)的一些脫氫酶還原
生成的 formazan 不是水溶性的，需要有特定的溶劑來(lái)溶解；而 WST-8 和
XTT 、MTS 產(chǎn)生的 formazan 都是水溶性的，可以省去后續(xù)的溶解步驟。
第二，WST-8 產(chǎn)生的 formazan 比 XTT 和 MTS 產(chǎn)生的 formazan 更易溶解。
第三，WST-8 比 XTT 和 MTS 更加穩(wěn)定，使實(shí)驗(yàn)結(jié)果更可靠。
第四，WST-8和 MTT、XTT 等相比線(xiàn)性范圍更寬，靈敏度更高，并且更加穩(wěn)定。
WST-8 對(duì)細(xì)胞無(wú)明顯毒性。加入 CCK-8 溶液顯色后，可以在不同時(shí)間反復(fù)
用酶標(biāo)儀讀板，檢測(cè)時(shí)間更加靈活，便于確定最佳測(cè)定時(shí)間。

注意事項(xiàng)
1. CCK-8 的培養(yǎng)時(shí)間一般為 1-4 小時(shí)，但在培養(yǎng) 30 分鐘左右即可取出肉眼
觀察顯色程度，根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)而定，需要摸索條件，CCK-8 的最佳反應(yīng)時(shí)
間以具體顯色的最佳時(shí)間為準(zhǔn)。
2. 使用 96 孔板進(jìn)行檢測(cè)時(shí)，如果細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)間較長(zhǎng)，一定要注意蒸發(fā)問(wèn)
題。一方面，由于 96 孔板周?chē)蝗ψ钊菀渍舭l(fā)，可以采取棄用周?chē)蝗?br /> 的辦法，改加相同量的 PBS 、水或培養(yǎng)液；另一方面，可以把 96 孔板置
于靠近培養(yǎng)箱內(nèi)水源的地方，以緩解蒸發(fā)。
3. 本試劑盒的檢測(cè)依賴(lài)于脫氫酶催化的反應(yīng)，所以還原劑 (例如一些抗氧
化劑) 會(huì)干擾檢測(cè)，如果待檢測(cè)體系中存在較多的還原劑，需設(shè)法去除。
用酶標(biāo)儀檢測(cè)前需確保每個(gè)孔內(nèi)沒(méi)有氣泡，否則會(huì)干擾測(cè)定。
4. 加入藥物中如含有金屬，對(duì) CCK-8 顯色有影響。終濃度為 1 mM 的氯化
亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會(huì)抑制 5% 、15% 、90% 的顯色反應(yīng)，使靈敏度降
低。如果終濃度是 10 mM 的話(huà)，將會(huì) 100% 抑制。
5. 培養(yǎng)基中的酚紅不會(huì)影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果，酚紅的吸光度可以在計(jì)算時(shí)，通過(guò)
扣除空白孔中本底的吸光度而消去，因此不會(huì)對(duì)檢測(cè)造成影響。
6. 本產(chǎn)品可以檢測(cè) ，但不能檢測(cè)酵母細(xì)胞。向 100 μL 培養(yǎng)液
中加入 10 μL CCK-8 溶液，并培養(yǎng) 1-4 小時(shí)或過(guò)夜。
7. CCK-8 試劑對(duì)細(xì)胞的毒性非常低。它和活細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶持續(xù)反應(yīng)使溶
液顏色不斷加深，OD 值不斷增加 (注: 活細(xì)胞內(nèi)的脫氫酶是持續(xù)產(chǎn)生的) 。
8. 要測(cè)定細(xì)胞的具體數(shù)量，建議同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。
9. 建議采用多通道移液器，以減小平行孔間的差異。
10. 以下方法可以終止 CCK-8 反應(yīng) (96 孔板) ：
(a). 在顯色反應(yīng)后，將培養(yǎng)板放置 4°C 冰箱內(nèi)。(b). 每孔加 10 μL 0.1 M HCl
溶液。(c). 每孔加 10 μL 1% (w/v) 的 SDS (十二烷基硫酸鈉) 溶液。
注意：反應(yīng)停止后，應(yīng)在 24 小時(shí)內(nèi)測(cè)定。
11. 本產(chǎn)品僅限于專(zhuān)業(yè)人員的科學(xué)研究用，不得用于臨床診斷或治療，不
得用于食品或藥品。
12. 為了您的安全和健康，請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。